在奔驰E300上，关闭定速巡航的步骤如下：
1. 首先，找到方向盘左侧的巡航控制按钮。这个按钮通常是一个带箭头的按钮，箭头表示车辆正在加速，而箭头的反面则表示减速或关闭巡航。
2. 在关闭巡航之前，请确保您的车速超过30公里/小时（约18英里/小时），这是启动定速巡航的最低要求速度。如果您的车速低于这个值，按巡航按钮没有任何反应。
3. 当您的车速达到至少30公里/小时时，按下巡航控制按钮，此时会听到“嗒”的一声，表示巡航已经启动。
4. 要关闭巡航，再次按下巡航控制按钮，此时会听到“嘀”的一声，表示巡航已被关闭。
5. 如果您想重新启用巡航，只需再次按下巡航控制按钮即可。
请注意，不同车型和年款的奔驰车可能略有不同，具体操作请参考您的汽车用户手册。